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Dra. Leticia Haydeé Ramírez Silva


+52(55)56232510

SNI I
PRIDE C
Doctora
Profesor Titular A de tiempo completo definitivo


Líneas de Investigación

Estructura, función y estabilidad de proteínas.

Proyectos

Caracterización cinética y estructural de la mutagénesis de los algunos residuos cercanos al sitio de unión del K+ de la piruvato cinasa de músculo de conejo.

En un estudio anterior sobre la filogenia de la familia de la piruvato cinasa, encontramos un árbol dicotómico en el que alrededor del 50% de las secuencias presentan Glu 117 y el otro 50% posee Lys117. Es interesante destacar que todas las piruvato cinasas caracterizadas que poseen Glu en esta posición son dependientes de K+, mientras que las únicas enzimas caracterizadas que poseen Lys117 son independientes de K+. Además encontramos que el Glu117 y la Lys117 covarían con un residuo de unión al K+ de la piruvato cinasa en posición (113), así como con residuos cercanos a esta región 114 y 120. Así pues, en este proyecto estamos interesados en construir las mutantes de covarianza con el residuo 117 y caracterizarlas con el objeto de comprender que residuos son necesarios para la expresión de la activación por catión monovalente de la piruvato cinasa.

Cristalogénesis y difracción de rayos X de las mutantes de piruvato cinasa de músculo de conejo E117K (colaboración con la Dra. Adela Rodríguez del IQ) y de aquéllas mutantes en que covarían con la posición 117 (colaboración con el Dr. Alfredo Torres del IFC).

El objetivo de estos proyectos es obtener la estructura de una piruvato cinasa independiente de K+ para dilucidar como es el sitio activo de la enzima cuando el residuo Glu 117 que le da la dependencia por K+ ha sido substituido por una Lys, así como de aquéllas mutantes relevantes que den información sobre selectividad iónica e interconversión entre las familias dependientes e independientes de K+ de la piruvato cinasa.

Proteólisis limitada de la piruvato cinasa de músculo de conejo en ausencia y en presencia de ligandos.

Es bien conocido que la unión de análogos del sustrato y/o productos inducen la conformación cerrada o activa de la enzima. En este proyecto estamos estudiando el efecto protector de los ligandos de la piruvato cinasa sobre la cinética de proteólisis de la proteinasa K. El objetivo de este proyecto es definir el patrón de proteólisis diferencial en presencia y ausencia de ligandos.

Efecto estabilizador de la trehalosa sobre la piruvato cinasa de músculo de conejo.

En este proyecto estamos estudiando el efecto termoprotector de un osmolito compatible muy usado en la literatura como protector a la desecación y estabilizador de la estructura cuaternaria de las proteínas. La hipótesis de este trabajo es que la trehalosa induce el mismo efecto que los ligandos; es decir llevar a la proteína a su conformación cerrada o activa y así proteger del efecto desnaturalizante de la temperatura. Asimismo se está estudiando si el efecto protector de la trehalosa ocurre a todos los niveles de la estructura de la enzima.

Publicaciones Recientes

  1. Barquera, B., Ramirez-Silva, L., Morgan, J.E., Nilges, M.J. 2006 A new flavin radical signal in the Na+-pumping NADH:quinone oxidoreductase from Vibrio cholerae: An EPR/electron nuclear double resonance investigation of the role of the covalently bound flavins in subunits B and C J Biol Chemistry 281, 36482-36491
  2. Oria-Hernández, J., Riveros-Rosas, H., Ramírez-Sílva, L.Dichotomic phylogenetic tree of the pyruvate kinase family: K +-dependent and -independent enzymes 2006 J Biological Chemistry 281, 30717-30724
  3. Oria-Hernández, J., Cabrera, N., Pérez-Montfort, R., Ramírez-Silva, L.Pyruvate kinase revisited: The activating effect of K+ 2005 J Biological Chemistry 280, 37924-37929
  4. Barquera, B., Nilges, M.J., Morgan, J.E., Ramirez-Silva, L., Zhou, W., Gennis, R.B.Mutagenesis study of the 2Fe-2S center and the FAD binding site of the Na+-translocating NADH:ubiquinone oxidoreductase from Vibrio cholerae 2004 Biochemistry 43 , 12322-12330
  5. Ramírez-Silva, L., Oria-Hernández, J. Selectivity of pyruvate kinase for Na+ and K+ in water/dimethylsulfoxide mixtures 2003 European Journal of Biochemistry 270 (11), 2377-2385.

Colaboradores

  • Dr. Jesús Oria-Hernández
  • Biol. Carlos Guerrero Mendiola

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